SEM掃描電鏡微生物樣品制備經(jīng)驗(yàn)分享
日期:2024-12-25 09:16:32 瀏覽次數(shù):3
掃描電鏡微生物樣品制備是一個(gè)復(fù)雜而精細(xì)的過程,以下是一些經(jīng)驗(yàn)分享:
一、樣品選擇與準(zhǔn)備
樣品選擇:
選擇適合SEM掃描電鏡觀察的微生物樣品,如細(xì)菌、真菌、藻類等。
確保樣品處于新鮮狀態(tài),避免使用已經(jīng)死亡或變質(zhì)的微生物。
取樣:
使用無菌工具進(jìn)行取樣,避免污染。
對(duì)于附著在固體表面的微生物,可以用無菌剪刀或刀片切取一小塊樣品。
對(duì)于液體培養(yǎng)基中的微生物,可以通過離心等方法收集菌體。
二、固定與清洗
固定:
使用適當(dāng)?shù)墓潭▌ㄈ缥於?duì)樣品進(jìn)行固定,以保持其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。
固定時(shí)間根據(jù)微生物種類和樣品大小而定,通常為1.5~2小時(shí)以上。
固定后,用適當(dāng)?shù)木彌_液(如PBS)沖洗樣品,以去除多余的固定劑。
清洗:
用PBS或其他適當(dāng)?shù)木彌_液對(duì)樣品進(jìn)行多次沖洗,以去除污染物和雜質(zhì)。
每次沖洗后,用注射器或吸管輕輕吸走上一步驟的沖洗液,避免損壞樣品。
三、脫水與置換
脫水:
使用不同濃度的乙醇溶液對(duì)樣品進(jìn)行梯度脫水,以去除樣品中的水分。
脫水過程中,乙醇的濃度應(yīng)逐漸升高,以避免樣品因急劇脫水而變形。
通常使用50%、70%、80%、90%和****的乙醇進(jìn)行脫水,每次脫水時(shí)間為10~15分鐘。
置換:
使用乙酸異戊酯等有機(jī)溶劑對(duì)樣品進(jìn)行置換,以去除乙醇并準(zhǔn)備進(jìn)行干燥。
置換過程中,可以將樣品在乙醇和乙酸異戊酯的混合液中浸泡一段時(shí)間,然后逐漸提高乙酸異戊酯的比例。
四、干燥與粘樣
干燥:
使用臨界點(diǎn)干燥儀對(duì)樣品進(jìn)行干燥,以避免樣品在干燥過程中變形或開裂。
干燥過程中,應(yīng)控制溫度和壓力等參數(shù),以確保樣品干燥均勻且不會(huì)受到損傷。
粘樣:
使用導(dǎo)電膠布或雙面膠將樣品粘貼在掃描電鏡的樣品臺(tái)上。
粘貼時(shí),應(yīng)確保樣品的觀察面向上,并且樣品與樣品臺(tái)之間緊密接觸。
五、導(dǎo)電處理與觀察
導(dǎo)電處理:
對(duì)于不導(dǎo)電或?qū)щ娦圆畹奈⑸飿悠?,需要進(jìn)行導(dǎo)電處理以提高其導(dǎo)電性。
常用的導(dǎo)電處理方法包括噴金、噴碳等。其中噴金是Z常用的方法之一,可以在樣品表面鍍上一層金膜以提高其導(dǎo)電性。
觀察:
將處理好的樣品放入掃描電子顯微鏡中進(jìn)行觀察。
在觀察過程中,應(yīng)調(diào)整顯微鏡的參數(shù)(如電壓、電流、放大倍數(shù)等)以獲得Z佳的圖像效果。
根據(jù)需要,可以對(duì)樣品進(jìn)行拍照或錄像以記錄觀察結(jié)果。
六、注意事項(xiàng)
避免污染:在整個(gè)制備過程中,應(yīng)始終保持操作環(huán)境的清潔和無菌狀態(tài),以避免樣品受到污染。
輕柔操作:在處理微生物樣品時(shí),應(yīng)盡量避免使用過于粗暴的操作方式,以免損壞樣品或影響其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。
選擇合適的固定劑和緩沖液:根據(jù)微生物的種類和特性選擇合適的固定劑和緩沖液進(jìn)行固定和清洗。
控制干燥條件:在干燥過程中,應(yīng)嚴(yán)格控制溫度和壓力等條件以避免樣品變形或開裂。
注意安全:在使用臨界點(diǎn)干燥儀等高壓設(shè)備時(shí),應(yīng)注意安全操作并遵循相關(guān)規(guī)定。
通過遵循以上步驟和注意事項(xiàng),可以成功地制備出適用于掃描電鏡觀察的微生物樣品并獲得高質(zhì)量的圖像結(jié)果。
聯(lián)系我們
全國(guó)服務(wù)熱線
4001-123-022
公司:微儀光電臺(tái)式掃描電子顯微鏡銷售部
地址:天津市東麗區(qū)華明**產(chǎn)業(yè)區(qū)華興路15號(hào)A座